喉返神经在颈椎前入路手术中的应用解剖学研究

目的　为临床颈椎前入路手术保护喉返神经提供解剖学依据。　方法　取成人尸体标本40具（男23,女17）,共80侧。在颈动脉鞘与气管食管间的颈根部找到喉返神经,测量各侧喉返神经起点、入气管食管沟点和入喉第一分支点各部横径及其与颈椎对应的位置关系。　结果　右侧喉返神经在T2椎体水平绕右锁骨下动脉上行,T1椎体水平自颈动脉鞘内侧缘穿出椎前筋膜,C7T1椎体水平向内、上、前进入气管食管沟;左侧喉返神经在T4椎体水平绕主动脉弓上行,在T2椎体水平进入气管食管沟,在沟内行走无脏筋膜穿入点,双侧喉返神经入喉第一分支在C6椎体水平。　结论　左侧喉返神经的解剖结构比右侧相对恒定,C3～C7颈椎手术选择左侧前入路较右侧更利于保护喉返神经。     

RTN4在胃癌发病机制中的作用

目的 了解RTN4蛋白在胃癌发病过程中的作用,为揭示胃癌发病的分子机制提供实验资料。方法 将pIRESneo3-RTN4真核表达载体转染胃粘膜上皮GES1细胞,建立RTN4高表达的GES1-RTN4细胞系;通过细胞生长曲线、平皿克隆与软琼脂集落形成实验、流式细胞仪,观察RTN4高表达对GES1细胞生长与增殖、周期与凋亡的影响;利用Western-blot检测GES1-RTN4细胞中IκBα蛋白的表达。结果 GES1-RTN4细胞的生长速度较GES1和GES1-pIRESneo3细胞加快,统计学意义显著（P＜0.01）;GES1-RTN4细胞较GES1和GES1-pIRESneo3细胞克隆体积大、数目多,统计学意义显著（P＜0.01）;GES1-RTN4细胞中S期细胞比例较GES1和GES1-pIRESneo3细胞增加,细胞增殖指数增加,细胞凋亡率降低,统计学意义显著（P＜0.01）;GES1-RTN4细胞中IκBα蛋白表达较GES1和GES1-pIRESneo3细胞减少,统计学意义显著（P＜0.01）。结论 RTN4通过活化NF-κB信号通路,提高细胞增殖指数,抑制细胞凋亡,促进GES1细胞的增殖。     

PD-L1蛋白在鼻咽癌中的表达及其临床意义

目的探讨PD L1在鼻咽癌中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学技术对收集的162例鼻咽癌组织进行PD L1蛋白的表达检测,并结合患者临床病理参数及预后信息,探讨其临床价值。结果PD L1蛋白表达水平与性别、年龄、PS评分、临床分期、吸烟情况等临床病理参数之间无显著差异(P>0.05)。PD L1阳性组与阴性组3年总生存率分别为92.3%与80.0%,差异具有统计学意义(P=0.026)。结论PD L1蛋白阳性鼻咽癌患者预后较好,有望成为鼻咽癌患者预后评估的生物标志物。     

胃癌患者血清miR-20a的表达及其与临床病理特征的关系

目的　探讨胃癌初诊患者血清miR-20a的表达情况及其与临床病理特征的关系。方法　采集45例原发胃癌初诊患者血清,应用实时定量PCR（qRT-PCR）,加入cel-miR-39作为数据标准化指标,检测血清miR-20a的表达量。结果　胃癌患者血清中miR-20a表达与胃癌分化程度、TNM分期及淋巴结转移密切相关（P<0.05）。低分化组血清miR-20a表达水平明显高于中分化组和高分化组。miR-20a在Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者血清中的表达水平明显高于Ⅰ期,有淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组。miR-20a的表达与患者的性别、年龄无明显相关性。结论　胃癌患者血清miR-20a表达与胃癌分化程度、临床分期及淋巴结转移相关,可能用于胃癌早期诊断和病情监测。     

铁皮石斛多糖对MPP+诱导的PC12

目的 观察铁皮石斛多糖对1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP⁺）所致PC12细胞损伤的抑制作用及可能机制。 方法 实验分为对照组、MPP⁺损伤模型组、铁皮石斛多糖组（50、100、200和400 μg/mL）。MPP⁺损伤模型组细胞用含10 μmol/L MPP⁺的培养基处理细胞24 h;铁皮石斛多糖组细胞用含50、100、200和400 μg/mL铁皮石斛多糖的培养基预处理2 h后,再加入MPP⁺（10 μmol/L）处理细胞24 h;对照组细胞给予等量生理盐水处理。MTT比色法检测细胞存活率,检测细胞内丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）的活性。 结果 与对照组比较,MPP⁺处理显著降低了PC12细胞的存活率,显著升高了细胞培养液中LDH的水平和细胞中MDA的含量,显著降低了细胞中SOD的活性（均P<0.05）;与损伤模型组比较,200和400 μg/mL铁皮石斛多糖组PC12细胞的存活率显著升高,细胞培养液中LDH的活性和细胞中MDA的含量显著升高,细胞中SOD的活性显著降低（均P<0.05）。 结论 铁皮石斛多糖抑制了MPP⁺诱导的PC12细胞损伤,其机制可能与铁皮石斛多糖抑制氧化应激有关。     

二氢杨梅素调控自噬抑制氧化低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞损伤的研究

目的观察二氢杨梅素（DMY）对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的影响,并探讨自噬在其中的作用。方法DMY（0.01、0.10、1.00和10.00 μmol/L）预处理HUVECs 2 h,用100.0 mg/L ox-LDL 继续培养细胞24 h。以辛伐他汀作为阳性对照组。采用噻唑蓝法检测细胞活力,Hoechst33258染色观察细胞核形态,透射电镜观察自噬体,Western blot检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3（LC3）、Beclin-1和p62/SQSTM1的表达,观察自噬抑制剂对DMY作用的影响。结果与对照组比较,ox-LDL组细胞的存活率降低（p <0.05）,细胞核呈集中高强度蓝色荧光,固缩致密浓染或碎块状致密浓染,颜色发白,细胞核较小,形态不规则,自噬体和自噬溶酶体数量增加;Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值上调,而p62的表达下调（p <0.05）。与ox-LDL组比较,0.1、1.0和10.0μmol/L DMY预处理组细胞存活率均升高;细胞核荧光强度降低,核固缩致密浓染和碎块状致密浓染减少,形态较规则;1.0 μmol/L DMY 预处理组的自噬体和自噬溶酶体数量增加;Beclin-1、LC3-Ⅱ的表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值上调,而p62 的表达下调（p <0.05）。自噬抑制剂3-MA 部分抵消DMY 抑制ox-LDL诱导的HUVECs 存活率降低（p <0.05）。结论DMY 能抑制ox-LDL诱导的HUVECs 损伤,其机制与诱导自噬有关。     

辛伐他汀改善神经源性肺水肿大鼠血清孵育后肺微血管内皮细胞的生长

目的　观察辛伐他汀对神经源性肺水肿（NPE）大鼠血清孵育后肺微血管内皮细胞（PMECs）生长的影响及Bax和Bcl-2表达的影响。　方法　制备NPE大鼠模型的血清,将体外培养的大鼠PMECs随机分成正常对照组、NPE24　h组、NPE48　h组、辛伐他汀24　h组、辛伐他汀48　h组;NPE组予NPE大鼠模型的血清分别孵育24　h和48　h,辛伐他汀组在NPE大鼠血清孵育的基础上予1　μmol／L辛伐他汀干预24　h和48　h。通过细胞计数法描记生长曲线观察各组细胞生长情况,Western-bolt和RT-PCR分别检测各组PMECs内Bax和Bcl-2蛋白与mRNA表达情况。　结果　NPE24　h组及48　h组PMECs生长明显减慢,倍增时间延长,有大量漂浮的细胞碎片;辛伐他汀24　h组和48　h组PMECs数量显著增高。同正常对照组相比,NPE24　h组和48　h组PMECs内Bax蛋白和mRNA表达显著增高（P<0.05）,而Bcl-2蛋白和mRNA表达降低（P<0.05）。与相应NPE组相比,辛伐他汀24　h组及48　h组Bax蛋白和mRNA表达显著降低（P<0.05）,而Bcl-2蛋白和mRNA表达增高（P<0.05）。同辛伐他汀24　h组相比,辛伐他汀48　h组PMECs内Bcl-2蛋白和mRNA表达显著增高（P<0.05）。　结论　辛伐他汀可改善NPE大鼠血清孵育后PMECs的生长,其机制可能与上调Bcl-2和下调Bax表达有关。     

HSP90α/β蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义

目的　观察热休克蛋白90α/β（heat　shock　protein　90α/β,HSP90α/β）在胃癌组织中的表达及临床意义,为胃癌的早期诊断与分子病理分型提供有价值的实验资料。方法　采用免疫组织化学染色结合组织芯片,观察HSP90α/β蛋白质在正常胃黏膜组织、癌旁组织及胃癌组织中的表达;然后分析HSP90α/β蛋白质在胃癌组织中表达的临床意义。结果　免疫组织化学染色结果显示,胃癌组织中HSP90α/β蛋白质表达的阳性率高于正常胃黏膜组织和癌旁组织（P<0.05）;癌旁组织中表达的阳性率高于正常胃黏膜组织（P<0.05）;淋巴结转移患者组织中表达的阳性率高于无淋巴结转移者（P<0.05）;Ⅲ～Ⅳ期患者组织中表达的阳性率高于Ⅰ～Ⅱ期（P<0.05）。结论　HSP90α/β蛋白质的表达与胃癌组织的发生、分化程度、淋巴结转移及TNM分期有关,即随着胃癌组织分化程度的降低、淋巴结转移的发生及TNM分期的增加而表达升高。     

生殖支原体脂质相关膜蛋白通过c-Src/ROS/Nrf2途径

目的 探讨生殖支原体脂质相关膜蛋白（LAMPs）诱导胎盘滋养层细胞表达血红素氧合酶-1（HO-1）的分子机制。 方法 用0.5～5 μg/mL生殖支原体LAMPs处理体外培养的胎盘滋养层细胞4～12 h,采用实时定量PCR和Western blot法分别检测HO-1 mRNA和蛋白的表达以及核因子相关因子-2（Nrf2）的核转位;比色法观察HO-1的酶活性;2′,7′-二氯二氢荧光黄二乙酸酯（H₂DCFDA）检测活性氧产生。分别采用酪氨酸激酶c-Src抑制剂PP1、活性氧抑制剂N-乙酰半胱氨酸（NAC）和Nrf2 siRNA干预,观察HO-1的表达情况。 结果 生殖支原体LAMPs能诱导滋养层细胞HO-1 mRNA和蛋白的表达,上调其酶活性。同时,LAMPs也能诱导其产生活性氧,并促使Nrf2核转位。PP1和NAC预处理后,可明显降低HO-1的表达水平以及细胞核内Nrf2含量。采用Nrf2 siRNA转染后,HO-1的表达显著减少。 结论 生殖支原体LAMPs通过c-Src/ROS/Nrf2途径诱导滋养层细胞表达HO-1。     

神经源性肺水肿大鼠模型的改进与评价

目的评价改进后的小脑延髓池穿刺法制作神经源性肺水肿大鼠模型的使用价值。方法 60只清洁级SD大鼠随机均分为4组:正常对照组、假手术组、小脑延髓池穿刺直接注射组(直接注射组)、小脑延髓池穿刺延长留置时间组(延长留置时间组)。延长留置时间组造模成功率达90%。直接注射组采用传统的小脑延髓池穿刺直接注射法造模;延长留置时间组即小脑延髓池穿刺成功后,在脑池内留置1 m L注射器针头20 min后注射纤维蛋白原(100 mg/m L)和凝血酶(200 U/m L)各0.075 m L。通过观察各组大鼠肺大体形态学、病理改变及比较生存时间,评价两种制模方法的价值。正常对照组不予任何干预。结果正常对照组无肺水肿表现。同直接注射组相比,延长留置时间组大鼠肺体积明显增大,肺泡及肺间质渗出明显增多。延长留置时间组大鼠生存时间较直接注射组缩短,分别为5.008±2.612 h和7.482±3.034 h(t=2.394,P=0.024)。结论小脑延髓池穿刺延长留置时间法复制的神经源性肺水肿症状典型,是研究神经源性肺水肿较为理想的动物模型。